2017

Titulo

Introducción de nuevos métodos de extracción de ácidos ribonucleicos en el Instituto de Hematología e inmunología.

Autores

Lesbia Fernández Martínez , Carmen Alina Díaz Alonso , Heidy Garrote Santana , Ana María Amor Vigil , Vera Ruiz Moleón

Resumen


Introduccion: La extracción de ácido ribonucleico (ARN) es una herramienta necesaria en el estudio de los genes, su expresión, y en la evolución y tratamiento de enfermedades de ahí la importancia de este trabajo en la introducción de métodos menos laboriosos y más eficientes para la obtención de ARN.

Objetivos: Evaluar el impacto de los nuevos métodos de extracción de ácidos ribonucleicos en los resultados de trabajo del servicio de biología molecular del Instituto de Hematología e Inmunología.

Métodos: Se evaluaron tres métodos de extracción de ARN: mezcla de tiocianato de guanidinio-fenol-cloroformo modificado (GTC),ARN QIAamp RNA Blood Mini Kit y el sistema de PAXgene Blood RNA en el laboratorio de biología molecular del Instituto de Hematología e Inmunología teniendo en cuenta los siguientes parámetros: pureza, rendimiento, calidad del ARN  y del ADN complementario, tiempo de extracción, volumen de muestra, posibilidades de automatización, empleo de material gastable, laboriosidad de la técnica y el uso de sustancias nocivas. Para esto se analizaron por cada método 10 muestras de sangre medular de pacientes oncohematológicos.

Resultados: Para cada uno de los métodos analizados el promedio de la relación de las lecturas de absorbancia a 260 y 280 nm fluctúa entre 1,80 y 2,29. El rendimiento del ARN es significativamente mayor en el método de GTC con una media de 1799 ng/µ. Sin embargo, de los tres métodos resultó el de menor pureza y mayor laboriosidad.

Conclusiones: Los sistemas de extracción de ARN empleados en el laboratorio de biología molecular son válidos para los estudios moleculares, pero existen diferencias entre ellos que deben ser tomados en consideración. Estos métodos tienen sus bondades y contrapartes negativas, por lo que su adecuación a la práctica diaria estará determinada por las condiciones y necesidades específicas del centro.


Citas


  1. Díaz Alonso CA, Garrote Santana H, Dra Amor Vigil AM, Suárez González Y, Fernández Martínez L, Ruiz Moleón V. Nuevos métodos de extracción de ácidos ribonucleicos (ARN): herramientas básicas en la biología molecular. Rev Cubana Hematol Inmunol Hemoter  [Internet]. 2015  Dic [citado  2017  Mar  27];  31(4). Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0864-02892015000400015&lng=es.
  2. Díaz-Alonso C, Garrote-Santana H, Amor-Vigil AM, Suárez-González Y, González-Mugica Romero R. Cuantificación de ácido ribonucleico para la realización de la técnica de RT- PCR. Rev Cubana Hematol Inmunol Hemoter. 2013 Sep;29(3):298-303.
  3. Malentacchi F, Pazzagli M, Simi L, Orlando C, Wyrich R, Günther K, et al. SPIDIA-RNA: second external quality assessment for the pre-analytical phase of blood samples used for RNA based analyses. PLoS One. 2014 Nov 10; 9(11):e112293. doi: 10.1371/journal. pone. 0112293. eCollection 2014
  4. Hernández AK, Guzmán-Barney M. Comparación de métodos de extracción de RNA para la detección por RT-PCR del Potato yellow vein virus (PYVV) en diferentes órganos de Solanum tuberosum grupo phureja. Rev Colomb Biotecnol. 2013; 15(1):71-81.
  1. Cayuela JM, Mauté C, Fabre AL, Nibourel O, Dulucq S, Delabesse E et al. A novel method for room temperature distribution and conservation of RNA and DNA reference materials for guaranteeing performance of molecular diagnostics in onco-hematology: a GBMHM study. Clin Biochem. 2015 Apr 12. pii: S0009-9120(15)00128-9.doi:10.1016/j.clinbiochem.2015.04.004.