Introducción: La Hiperplasia Adrenal Congénita (HAC) abarca un conjunto de trastornos de herencia autosómica recesiva, causados por la deficiencia de alguna de las enzimas de la vía esteroidogénica suprarrenal. Más del 90% de los casos se debe a un déficit de actividad 21-hidroxilasa (HAC-21OHD) por mutaciones en el gen CYP21A2. En el 75% de los pacientes estas mutaciones son microconversiones procedentes de un pseudogen homólogo cercano. Una de las más frecuentes es la mutación I172N, asociada a formas severas de enfermedad. El presente trabajo introduce la detección de esta mutación en el esquema de estudio molecular de HAC-21OHD del Centro Nacional de Genética Médica de Cuba. Objetivo. Estandarizar y determinar la mutación I172N en pacientes cubanos con HAC. Métodos: Se procesaron 79 muestras de ADN de pacientes no relacionados con diagnóstico presuntivo de HAC-21OHD La estrategia empleada consistió en la amplificación específica del CYP21A2, seguida de una PCR-ACRS anidada para la amplificación del locus I172N y posterior digestión enzimática. Resultados:. Se detectó la mutación I172N en 8 casos: 3 homocigóticos y 5 heterocigóticos. La frecuencia alélica fue de 0.0696. Cuatro de los pacientes con I172N resultaron heterocigóticos compuestos con otras mutaciones previamente estudiadas. Los resultados obtenidos mediante PCR-ACRS/digestión enzimática fueron verificados por secuenciación de ADN en tres casos, para los tres genotipos posibles. Conclusiones: la mutación I172N se encuentra presente en los pacientes cubanos con HAC, permitiendo ampliar las posibilidades de diagnóstico molecular y mejorar el asesoramiento genético.